Membres de l'équipe

Responsable(s) plateau
Gaits
Frédérique

Gaits Frédérique

Frederique.Gaits@inserm.fr

05.61.32.41.51

Membre(s) du plateau
D'Angelo
Romina

D'Angelo Romina

romina.dangelo@inserm.fr

05.31.22.56.45

Mazars
Anne

Mazars Anne

Anne.Mazars@inserm.fr

05.61.32.56.05

                                                                                 

 Responsable du plateau : Frédérique Gaits

 

 

Le plateau d'imagerie cellulaire de l'I2MC est localisé sur le site Rangueil (Bâtiment L2, CHU Rangueil). Le plateau technique est ouvert à toute la communauté scientifique régionale.

Le plateau est membre du GDR 2588 CNRS-Microscopie fonctionnelle du vivant.
De plus, les installations gérées par le plateau technique d'imagerie sont rattachées à la plateforme TRI (Toulouse Réseau Imagerie) de Philippe Cochard depuis 2003. Nous suivons la démarche qualité selon la norme ISO 9001 version 2008. Depuis Janvier 2010 la plateforme TRI est certifiée ISO 9001/version 2008

Le demandeur doit tout d'abord envoyer un mail de demande à : imagerie.i2mc@inserm.fr

A cette occasion, une proposition de rendez-vous est faite; l'ingénieur plateau oriente le demandeur vers la solution d'imagerie la plus appropriée pour ses expériences. Le contrat d'utilisation du plateau est remis à l'utilisateur. Si la formation est envisagée, un rendez-vous est pris pour une formation à l'issu de laquelle l'utilisateur est validé sur l'appareil et peut gérer lui-même ses réservations. L'utilisation des microscopes requiert une formation en 2 sessions de deux heures.

Une assistance pour l'acquisition d'images est fournie sur rendez-vous tous les jours. Sur les machines très surchargées (confocal 780), n'hésitez pas à prendre contact 2 semaines à l'avance pour toute demande.

Sur demande, le traitement des images (calibration, annotations, quantification de fluorescence, reconstruction 3D ou 4D, déconvolution, tracking...) peut faire l'objet d'une formation ou d'une collaboration avec le plateau technique. Il en est de même pour la mise au point et le développement des T-Techinques (FRTE, FLIP, FRAP...).

Pour plus d'information et d'orientation, n'hésitez pas à contacter imagerie.i2mc@inserm.fr

 

 

Matériels et Ressources


  • Microscope Confocal ZEISS LSM 510
Le Microscope Confocal ZEISS LSM 510 est équipé de 3 lasers dans le visible (un laser argon multi-raies à 458 nm, 477 nm, 488 nm, et 514 nm, et deux lasers hélium-néon à 543 nm et 633 nm), sur statif inversé. Les objectifs présents sont un 10X et 25x pour l'observation globale, un 40X et un 63X à haute résolution pour l'observation sub-cellulaire.
La possibilité de thermorégulation de la préparation permet l'acquisition d'échantillons vivants. Le module FCS Confocor-2 offre la possibilité de mesurer des interactions moléculaires au sein des cellules vivantes. Le traitement d'image est fait soit sous le logiciel ZEISS LSM, soit sous le logiciel gratuit Image J.
LSM510

 

 

  • Station de vidéo-microscopie Champ Large Zeiss Cell-Observer
Le vidéo-microscope inversé Zeiss Cell Observer Z1, est équipé d'une chambre thermo-régulée et un module de CO2 qui offrent un environnement de travail adapté au fixé et au vivant.
- Deux caméras Hamamatsu, ORCA R² et une EM-CCD permettent de privilégier selon l'application la qualité d'image ou la rapidité respectivement. Il offre une large gamme d'expériences, notamment grâce aux choix des objectifs présents (longue distance de travail) et filtres d'excitation et d'émission.
- Deux sources d'illumination :
1. rapide (COLIBRI LED system) permettant de changer les longueurs d'ondes d'excitation très rapidement. 4 longueurs d'ondes disponibles: Green (GFP), Red (CY3), Blue (DAPI), far Red (CY5)
2. Autre longueurs d'ondes possibles en utilisant la source HXP et des filtres d'émission sur roues rapides. Il est également équipé pour le FRET en CFP/YFP.
L'appareil est également utilisé pour des expériences de microfluidique sur différents supports (Cellix, Ibidi, support pour plaque Bioflux).
Cette configuration permet des investigations sur cellules vivantes à des temps très rapides (quelques secondes pour la formation de thrombi plaquettaires en flux) et sur longue durée (jusqu'à 1 semaine d'observation possible). Le système est adapté pour une multiplicité de supports (fonds en plastique et verre, boites, multiwells, Labtek etc)
Il est piloté par le logiciel ZEN  2012 édition blue, avec des modules d'acquisition et de traitement optimisés. Il est possible de réaliser des acquisitions en Multi-positions, mosaiques, et Z stacks en même temps. L'intégration du module « definite focus » permet un maintien de la stabilité en multiposition sur des temps longs.
cell observer
 
  •  Confocal Microscope Zeiss LSM 780
Le Microscope inversé Zeiss Observer Z1, est équipé de trois types de sources d'excitation lasers: Diode 405 nm, Argon (458, 488, 514nm), DPSS : 561nm et HeNe 633 nm. Un détecteur GaAsp très sensible avec un rendement quantique allant jusqu'à 45% pour une plage de longueur d'onde spécifique, et une détection spectrale parallèle allant jusqu'à 34 canaux simultanément en mode lambda. Cet appareil  possède également un module FCS (Fluorescence Correlation Spectrometry) et une possibilité d'exploration avec les F-Techniques (FRET, FRAP etc.). L'appareil est encagé pour un contrôle environnemental en température et CO2 permettant de faire des acquisitions sur cellules vivantes. Tous les supports de cultures peuvent être montés (chambre Ibidi 35 mm, format Labtek, etc....)
Il est piloté par le logiciel ZEN 2012 édition black, ayant des applications avancées (Reconstructions de volumes 3D, projections, quantification, colocalisation...). Le détecteur spectral intégré offre la possibilité d'imager en parallèle jusqu'à 8 couleurs sur un même échantillon, en changeant les paramètres en x/y/z, et en faisant également des images en mode mosaïque (jusqu'à 5 dimensions peuvent donc être intégrées en temps réel).
LSM780

 

  • Microscopie Super-résolution Zeiss ELYRA PS. 1

Le plateau sera équipé courant premier semestre 2015 d'un système Zeiss ELYRA PS-1. Cet appareil permet d'explorer en parallèle sur un même échantillon des structures subcellulaire en super-résolution selon différents modes :
- technologie SR-SIM : la « structured illumination microscopy » permet d'obtenir des résolutions de l'ordre de 100 nm, en trois couleurs (utilisation de fluorophores et protéines fluorescentes classiques, compatibles avec l'imagerie de la cellule vivante) et en 3D.
- technologie PALM/STORM : la « photo-activated localization microscopy » permet de descendre la résolution à quelques dizaines de nm en utilisant des fluorophores ou des protéines fluorescentes pho-activables. La « stochastic optical reconstruction microscopy » permet d'obtenir des résolutions allant jusqu'à la molécule unique.
Le microscope permettra des analyses en 3D, ainsi que la possibilité unique de passer de l'une à l'autre des technologies sur les mêmes échantillons en utilisant les fluorophores adéquats.

 elyra super res